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培养基的常用灭菌方法
[ 作者:admin    更新时间:2007-04-19    文章录入:admin ]

培养菌种所用的各种培养基,在接入菌种培养前,必须进行完全彻底的灭菌处理,使各种培养基成为无菌状态,以防止生产中出现杂菌污染,确保生产的顺利进行。常用培养基的灭菌方法通常有高压蒸气灭菌法和常压(就是指无压力)蒸气灭菌法两种。

(一)高压蒸气灭菌法

将培养基按比例配好后,装入耐压的玻璃容器中,塞好棉塞,用隔水纸把棉塞包好,再置于高压蒸气灭菌锅内,关闭高压锅的盖子,不关排余水的阀门,打开进蒸气的阀门进气,当排余水阀门向外喷出蒸气时,关闭余水阀门,开始缓缓加热升压,当锅内压力上升时,再打开排余水阀门排余水一次。注意蒸气阀门不要打开过大过猛,以防容器中培养基冲出或浸湿棉塞。待压力表指针指向1.0-1.2Kg/cm2时, 温度大约在100一125℃左右,这样保持20—30分钟。达到时间后,关闭供气阀门或电源,然后打开余水阀门进行缓慢的排气,当压力表指针回到0时,才可打开高压锅盖,取出培养基,这就达到了灭菌的目的。使用高压锅对培养基灭菌时,应注意那些在高压、高温下容易发生变化的培养基不宜采用,以免灭菌后菌种不能利用。

高压蒸气灭菌锅有两种形式,一种是采用外来蒸气,另一种则利用自身所带电器设备对水进行加热产生蒸气,使用后一种时,应随时注意锅内的水位,防止因缺水而烧坏高压锅。高压蒸气灭菌法,具有灭菌时间短,灭菌彻底等优点。

(二)常压蒸气灭菌法

常压蒸气灭菌法,其操作方法是把已装好的各种培养基放入常压蒸气灭菌锅内,盖好盖子(盖上应装有排气阀使蒸气能不断地排出),打开进气阀门,升温至80—100℃,保持30—45分钟,以杀死培养基中各种微生物的营养细胞。灭菌到时后,取出冷却,置于30—37℃的恒温培养箱内培养24小时,使部分没有被杀死的微生物的芽胞萌发成为营养细胞,再用同样的方法处理二次(共计三次),就可杀死培养基中所有的芽胞和细胞,如此就可达到灭菌的目的。

以上两种方法对培养基的灭菌,根据生产实践,后一种方法比前一种方法好(但对某些必须采用快速、高温的培养基,则宜用前一种方法),这是因为采用高压蒸气灭菌时,由于温度、压力较高,使培养基中某些营养物质发生分解和焦化,营养成分遭到破坏,培养基中的凝固剂--琼脂的凝固性也将受到不同程度的影响,所以,菌种纯培养所用培养基最好采用常下蒸气灭菌法灭菌。例如某含糖液通过灭菌损失情况如表。

培养基中的糖类物质在不同温度、压力的损坏情况

名称条件

121℃

115—118℃

113—115℃

100℃

作用15分钟

作用20分钟

作用20分钟

作用30分钟

葡萄糖液(10%)

24%

18—19%

0.6%

8.02%

蔗糖液(10%)

12—13%

2.26%

1.35%

3.65%

压力Kg/cm2

1.05

0.7—0.84

0.56—0.7

0

另外,采用某些化学灭菌剂加入培养基中,也可起到抑制或灭菌作用。但是,抑制了其它杂菌,对生产所用菌也产生抑制和影响,故此方法在菌种纯培养阶段一般不采用。而大生产发酵中有时采用少量的化学灭菌剂,则有利于防止杂菌的污染。例如,糖蜜发酵前,往往每吨糖蜜加入300—400g的漂白粉或者加入40%的甲醛 400—500ml,都利于防止糖蜜发酵时细菌的污染。

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