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食品中六六六、滴滴涕残留量的测定方法

［作者：admin 更新时间：2007-04-21 文章录入：admin ］

1 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中六六六、滴滴涕残留量的测定方法。
本标准适用于食品中六六六、滴滴涕残留量的测定。
气相色谱法检测限：α—666、β—666、γ—666、δ—666依次为0.2，0.8，0.3，0.4μg/kg。
p，p′－DDE、o，p′－DDT、p，p′－DDD、p，p′－DDT依次为0.5，2.7，1.6，4.0μg/kg。
薄层色谱法最低检测量为0.02μg，适宜范围为0.02～0.20μg。
第一篇气相色谱法(第一法)
2 原理
样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量。电子捕获检测器对于负电极强的化合物具有较高的灵敏度，利用这一特点，可分别测出微量的六六六和滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。
出峰顺序：α－666、γ－666、β－666、δ－666、p，p′－DDE、o，p′－DDT、p，p′－DDD、p，p′－DDT。
3 试剂
使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需经重蒸馏。
3.1 丙酮。
3.2 正己烷。
3.3 石油醚：沸程30～60℃。
3.4 苯。
3.5 硫酸。
3.6 无水硫酸钠。
3.7 硫酸钠溶液(20g/L)。
3.8 六六六、滴滴涕标准溶液：准确称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和p，p′－滴滴涕、p，p′－滴滴滴、p，p′－滴滴伊、o，p′－滴滴涕(α－666、β－666、γ－666、δ－666、p，p′－DDT、p，p′－DDD、p，p′－DDE、o，p′－DDT)各10.0mg，溶于苯，分别移入100mL容量瓶中，加苯至刻度，混匀，每毫升含农药100.0μg，作为储备液存于冰箱中。
3.9 六六六、滴滴涕标准使用液：将上述标准储备液以己烷稀释至适宜浓度，一般为0.01μg/mL。
4 仪器
4.1 小型粉碎机。
4.2 小型绞肉机。
4.3 组织捣碎机。
4.4 电动振荡器。
4.5 旋转浓缩蒸发器。
4.6 吹氮浓缩器。
4.7 气相色谱仪，具有电子捕获检测器(ECD)。
5 分析步骤
5.1 提取
5.1.1 称取具有代表性的样品(适用于生的及烹调加工过的蔬菜、水果或谷类、豆类、肉类、蛋类)约200g，加适量水，于捣碎机中捣碎，混匀。称取匀浆2.00～5.00g，于50mL具塞三角瓶中，加10～15mL丙酮，在振荡器上振荡30min，过滤于100mL分液漏斗中，残渣用丙酮洗涤四次，每次4mL，用少许丙酮洗涤漏斗和滤纸，合并滤液30～40mL，加石油醚20mL，摇动数次，放气。振摇1min，加20mL硫酸钠溶液(20g/L)，振摇1min，静置分层，弃去下层水溶液。用滤纸擦干分液漏斗颈内外的水，然后将石油醚液缓缓放出，经盛有约10g无水硫酸钠的漏斗，滤入50mL三角瓶中。再以少量石油醚分三次洗涤原分液漏斗、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，将石油醚浓缩，移入10mL具塞试管中，定容至5，0mL或10.0mL。
5.1.2 称取具有代表性的乳样品2.00g，于10mL具塞试管中，加4mL丙酮，振摇1min，加4mL石油醚，振摇1min。静置分层。将上层石油醚溶液移入另一25mL具塞试管中，再加1mL石油醚于原试管中，不摇。取出上层石油醚合并于25mL试管中，重复两次。再加与石油醚等体积的硫酸钠溶液(20g/L)，摇混，分层。将上层石油醚溶液取出经无水硫酸钠滤入10mL具塞试管中，再加1mL石油醚于原25mL试管中，不摇。取出上层液合并于10mL试管中，重复两次。提取液定容至4.0mL。
5.1.3 称取具有代表性的均匀食用油样品0.50g以石油醚溶解于10mL试管中，定容至10.0mL。
5.2 净化
5.0mL提取液加0.50mL浓硫酸，盖上试管塞。振摇数次后，打开塞子放气，然后振摇0.5min，于1600r/min，离心15min，上层清液，供气相色谱法分析用。
5.3 测定
5.3.1 气相色谱参考条件
5.3.1.1 色谱柱：内径3～4mm，长1.2～2m的玻璃柱，内装涂以OV－7(15g/L)和QF－1(20g/L)的混合固定液的80～100目硅藻土。
5.3.1.2 Ni－电子捕获检测器：汽化室温度：215℃；色谱柱温度：195℃；检测器温度：225℃；载气(氮气)流速：90mL/min；纸速：0.5cm/min。
5.3.2 测量与计算
电子捕获检测器的线性范围窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应的制备各组分的标准曲线，从而计算出样品中的含量。
六六六、滴滴涕及异构体或代谢物含量按式(1)计算。

式中：X₁——样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg/kg；
A₁——被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，ng；
V₁——样品净化液体积，mL；
V₂——样液进样体积，μL；
m₁——样品质量，g。
结果的表述：报告平行测定的算术平均值的二位有效数。
5.3.3 色谱图

5.3.4 允许差
相对相差≤15％。
第二篇薄层色谱法(第二法)
6 原理
样品中六六六、滴滴涕经有机溶剂提取，并经硫酸处理，除去干扰物质，浓缩，点样展开后，用硝酸银显色，经紫外线照射生成棕黑色斑点，与标准比较，可概略定量。
7 试剂
除同3.1～3.8外，还需以下试剂。
7.1 氧化铝G：薄层色谱用。
7.2 硝酸银溶液(10g/L)。
7.3 硝酸银显色液：称取硝酸银0.050g溶于数滴水中，加苯氧乙醇10mL，加30%(V/V)过氧化氢溶液10μL，混合后贮于棕色瓶中，放冰箱内保存。
7.4 六六六、滴滴涕标准使用液：各吸取六六六、滴滴涕标准溶液(3.8)2.0mL，分别移入10mL容量瓶中，各加苯至刻度，混匀。每毫升含农药20μg。
8 仪器
除同4.1～4.6外，还需以下仪器。
8.1 薄层板涂布器。
8.2 玻璃板：5cm×20cm。
8.3 展开槽：内长25cm，宽6cm，高4cm。
8.4 玻璃喷雾器。
8.5 紫外线杀菌灯：15W。
8.6 微量注射器或血色素吸管。
9 分析步骤
9.1 提取
同5.1。
9.2 净化
10mL提取液浓缩至1mL，加0.1mL浓硫酸，盖上试管塞振摇数下，打开塞子放气，再振摇0.5min，于1600r/min，离心15min。上层清液供薄层色谱分析。
9.3 测定
9.3.1 薄层板的制备
称取氧化铝G4.5g，加1mL硝酸银溶液(10g/L)及6mL水，研磨至糊状，立即涂在三块5cm×20cm的薄层板上，涂层厚度0.25mm，于100℃烘0.5h，置于干燥器中，避光保存。
9.3.2 点样
离薄层板底端2cm处，用针划一标记。在薄层板上点1～10μL样液和六六六、滴滴涕标准溶液，一块板可点3～4个。中间点标准溶液，两边点样品溶液。也可用滤纸移样法点样。
9.3.3 在展开槽中预先倒入10mL丙酮－己烷(1＋99)或丙酮－石油醚(1＋99)。将经过点样的薄层板放入槽内。当溶剂前沿距离原点10～12cm时取出，自然挥干。
9.3.4 显色
将展开后的薄层板喷以10mL硝酸银显色液，干燥后距紫外灯8cm处照10～20min，六六六、滴滴涕等全部显现棕黑色斑点。
10 计算

式中：X₂——样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg/kg；
A₂——被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，μg；
V₃——样品浓缩液总体积，mL；
V₄——点板样液体积，μL；
m₂——样品质量，g。
结果的表述：报告平行测定的算术平均值的二位有效数。
注：① 食品中六六六残留量以α－666、γ－666、β－666、δ－666四种异构体总和计，滴滴涕残留量以p，p′－DDE、o，p′－DDT、p，p′－DDD、P，p′－DDT的总和计。
② 依比移值大小，斑点出现的顺序为p，p′DDE、o，p′－DDT、p，p′－DDT.α—666、p，p′－DDD、γ－666、ββ－666、δ—666。
11 允许差
相对相差≤15%。
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。

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