1 大鼠交配试验
1.1 原理
观察受试物对成年大鼠交配的影响，一般观察扑捉潜伏期、扑捉次数、扑捉率、交配潜伏期、交配次数、交配率等指标，以判断受试物对雄性大鼠性交能力的影响。
1.2 试剂
0.6%戊巴比妥钠、0.1%苯甲酸雌二醇注射液、2%黄体酮注射液、青霉素
1.3 实验方法
1.3.1 实验动物 出生3个月左右的Wistar或SD种性成熟大鼠，每组20只，雌雄各半。
1.3.2 剂量分组 设1个阴性(蒸馏水)对照组和3个受试物剂量组，必要时可增设溶剂对照组和阳性对照组。3个受试物剂量中，其中1个应是人每公斤体重日推荐摄入量的5倍，另2个剂量根据受试物的具体情况上、下浮动。
1.3.3 实验步骤
1.3.3.1 雌性大鼠准备 雌性大鼠在0.6%戊巴比妥钠(45mg/kg)麻醉下，行双侧卵巢切除术，术后肌注青霉素2万U/kg，连续3d。卵巢切除二周后方可进行试验。试验前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20ng/只，4h前再次经皮下注射黄体酮注射液500ug/只。
1.3.3.2 雄性大鼠准备 雄性大鼠按剂量每日灌胃给受试物1次，连续15－30日。
1.3.3.3 交配试验 将雄性大鼠单独放入笼内5分钟，使其适应环境，然后，每笼放入一只雌鼠，开始记录下列指标：
1.3.3.3.1 扑捉潜伏期 自雌鼠投入至雄鼠第一次扑捉雌鼠时间(时间以秒计)
1.3.3.3.2 扑捉次数 20分钟内各组雄鼠平均扑捉雌鼠次数
1.3.3.3.3 扑捉率 20分钟内各组雄鼠扑捉雌鼠的发生率
1.3.3.3.4 交配潜伏期 自雌鼠投入至雄鼠第一次射精时间(时间单位以秒计)
1.3.3.3.5 交配次数 20分钟内各组雄鼠平均射精次数
1.3.3.3.6 交配率 20分钟内各组雄鼠射精的发生率
1.4 数据处理及结果判定
试验数据采用方差分析方法。受试物组与对照组比较，至少一项指标呈阳性并经统计学处理有显著性差异(P＜0.05)，即可判定该受试物交配试验阳性。
2 小鼠交配试验
任选下列方法之一
2.1 正常雄性小鼠交配试验
2.1.1 原理
观察受试物对成年雄性小鼠交配的影响，一般观察交配潜伏期、交配次数等指标，以判断受试物对雄性小鼠性交能力的影响。
2.1.2 实验方法
2.1.2.1 实验动物 成年雄性小鼠，每组10只；成年雌性小鼠，每组30只。
2.1.2.2 剂量分组 设1个阴性(蒸馏水)对照组和3个受试物剂量组，必要时可增设溶剂对照组和阳性对照组。3个受试物剂量中，其中1个应是人每公斤体重日推荐摄入量的10倍，另2个剂量根据受试物的具体情况上、下浮动。
2.1.2.3 实验步骤 每天给雄性小鼠受试物一次，连续21d。于最后一次给受试物30min后，取成年雌性小鼠与雄性小鼠合笼(雌：雄＝3∶1)，置于暗室内观察，记录合笼至第一次交配的时间(交配潜伏期)以及20min内交配次数。
2.1.3 数据处理及结果判定
试验数据采用方差分析方法。受试物组与对照组比较，至少一项指标呈阳性并经统计学处理有显著性差异(P＜0.05)，即可判定该受试物交配试验阳性。
2.2 慢性悬吊应激性功能紊乱模型交配试验
2.2.1 原理
雄性小鼠处于慢性悬吊应激状态时，性功能可见明显下降。以此为模型，观察受试物提高小鼠性功能的作用强度和效力。一般观察交配潜伏期、交配次数等指标，以判断受试物对雄性小鼠性交能力的影响。
2.2.2 实验方法
2.2.2.1 实验动物 健康成年雄性小鼠，每组10只；健康成年雌性小鼠，每组30只。
2.2.2.2 剂量分组 设1个阴性(蒸馏水)对照组和3个受试物剂量组，必要时可增设溶剂对照组和阳性对照组。3个受试物剂量中，其中1个应是人每公斤体重日推荐摄入量的10倍，另2个剂量根据受试物的具体情况上、下浮动。
2.2.2.3 实验步骤 于实验开始第1天，给予慢性悬吊应激刺激。将小鼠头朝下悬吊，下面为18℃的水，使小鼠处于强迫抬头，呈挣扎的紧张状态。第1天吊30min，以后逐日增加10～20min，直至1h。每次解除应激状态后10min，给予受试物，连续21d。于最后1次给受试物30min后，取成年雌性小鼠与雄性小鼠合笼(雌：雄＝3∶1)，置于暗室内观察，记录合笼至第一次交配的时间(交配潜伏期)，20min内交配次数。
2.2.3 数据处理及结果判定
试验数据采用方差分析方法。受试物组与对照组比较，至少一项指标呈阳性并经统计学处理有显著性差异(P＜0.05)，即可判定该受试物交配试验阳性。
3 勃起试验
3.1 原理
应用去势成年雄性大鼠进行实验，以电刺激诱使阴茎勃起，观测受试物对阴茎勃起的潜伏期等指标的影响，以判断受试物对性功能的影响。
3.2 仪器和试剂
电刺激仪、丙酸睾丸素注射液(50g/L)、0.6%戊巴比妥钠、青霉素
3.3 实验方法
3.3.1 实验动物 断乳1个月左右的Wistar或SD种雄性大鼠，每组10只，去势，
3.3.2 剂量分组 设1个阴性对照组和三个受试物剂量组，必要时可设1个正常动物对照组及1个阳性对照组(丙酸睾丸素)。3个受试物剂量中其中一个应是人每公斤体重日推荐摄入量的5倍，另2个剂量根据受试物的具体情况上、下浮动。
3.3.3 实验步骤 动物在0.6%戊巴比妥钠(45mg/kg)麻醉下，消毒阴囊皮肤，摘除双侧睾丸。术后肌注青霉素2万U/kg，连续3日，然后分组，经口给予受试物(但阳性对照组为皮下注射丙酸睾丸素，2mg/kg)，每日一次，连续20日。给受试物后第21日，将电刺激仪的刺激电极放置于大鼠阴茎部位，给予局部电刺激，电流强度为4mA，记录从刺激开始至阴茎勃起时间(勃起潜伏期)。
3.4 数据处理及结果判定
结果进行方差分析受试物组与对照组比较，经统计差异有显著性(P＜0.05)，可判定该受试物勃起试验阳性。 |
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