前 言
本标准于1998年4月20日首次发布。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准起草单位：河北省卫生防疫站、天津市食品卫生监督检验所、山西省食品卫生监测所。
本标准主要起草人：韩会欣、贾丽华、常凤启、王萌国、高唯勤。
本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。
1 范围
本标准规定了用液相色谱法测定食品中游离棉酚的含量。
本标准适用于植物油或以棉籽饼为原料的其他食品中游离棉酚的测定，最低检出量为5ng，最低检出浓度5mg/kg。
2 原理
植物油中的游离棉酚经无水乙醇提取，经C18柱将棉酚与样品中杂质分开，在235nm处测定。
水溶性样品中的游离棉酚经无水乙醚提取，浓缩至干，再加入乙醇溶解，用C18柱将棉酚与样品中杂质分开，在235nm处测定。根据色谱峰的保留时间定性，外标法峰高定量。
3 试剂
本标准所用试剂凡未指定者，均为分析纯(A.R)，水为石英亚沸蒸馏水。
3.1 磷酸。
3.2 无水乙醇。
3.3 无水乙醚。
3.4 普通氮气。
3.5 甲醇：经0.5μm滤膜过滤。
3.6 棉酚标准储备液：精密称取0.1000g棉酚纯品，用无水乙醚溶解，并定容至100mL，此溶液相当于每毫升含棉酚1.0mg。
3.7 棉酚应用液：取1mg/mL棉酚储备液5.0mL于100mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，此溶液相当于每毫升含棉酚50μg。
3.8 磷酸水：取300mL水，加6.0mL磷酸，混匀，经0.5μm滤膜过滤。
4 仪器
4.1 SY－5060液相色谱仪(带UV－100紫外检测器)。
4.2 KD－浓缩仪。
4.3 离心机：3000r/min。
4.4 100μL微量注射器。
4.5 Micropark－C18(250mm－φ6mm)不锈钢色谱柱。
5 分析步骤
5.1 色谱条件：柱温40℃；流动相，甲醇：磷酸水＝85∶15；测定波长235nm；流量1.0mL/min；纸速0.25mm/min，衰减：1；灵敏度：0.02 AUFS；进样10μL。
5.2 试料制备
5.2.1 植物油：取油样1.000g，加入5mL无水乙醇，剧烈振摇2min，静置分层(或冰箱过夜)，取上清液过滤，离心，上清液即为试料，10μL进液相色谱。
5.2.2 水溶性样品：吸取样品10.0mL于离心试管中，加入10mL无水乙醚，振摇2min，静置5min，取上层乙醚层5mL，用氮气吹干，用1.0mL无水乙醇定容，过滤膜，即为试料，取10μL进液相色谱仪。
5.3 测定
5.3.1 标准曲线制备：准确吸取1.00，2.00，5.00，8.00mL的50μg/mL的棉酚标准液于10.0mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，此溶液相应于5，10，25，40μg/mL的标准系列，进样10μL，作0～50μg/mL的标准系列，根据响应值绘制标准曲线。
5.3.2 色谱分析：取10μL样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高，根据保留时间确定游离棉酚，根据峰高，从标准曲线上查出游离棉酚含量。
6 结果计算
见式(1)。
式中：X——样品中棉酚的含量，mg/kg；
m——样品质量，g；
A——测定试料中棉酚的含量，μg/mL；
5——折合所用无水乙醇的体积，mL。
7 精密度和允许误差
重复测定变异系数(相对标准差)小于6%；两次平行测定相对允许误差绝对值小于10%；平行测定结果用算术平均值表示。 |
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