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在进行酵母和霉菌的纯培养时，通常采用棉花作成的棉塞，来封闭试管或三角瓶等培养仪器的管口和瓶口，达到既不能使空气中的微生物进入试管或三角瓶内，又能保证试管内菌种生长所需的无菌空气和排出多余的热量。二氧化碳气体等，在棉塞的制作过程中，不少培养菌种的工作人员，由于对微生物和生产中所用菌种的生长、繁殖性能缺乏足够的了解，或其它方面的原因，所制备的棉塞不能满足要求，或多或少地出现一些不正常的现象，根据某些厂生产的经验和教训，简略地谈一下棉塞制作中的注意事项。
(1)用来制作棉塞的棉花，不能用脱脂棉。虽然脱脂棉质量较好，纤维细长，有利于棉塞的制作，但是脱脂棉最容易吸收空气中的水分而使棉花受潮，棉塞受潮后，用来封闭试管或三角瓶，空气中的微生物就会沿湿润的棉塞进入，引起杂菌污染。
(2)无论做成两端半圆形还是一端半圆形的棉塞，都要求能塞进试管口或三角瓶口，使棉塞与壁间能密合，否则空气中的微生物就会沿空隙进入试管或三角瓶中。
(3)所制棉塞的大小，必须根据试管或三角瓶的大小而定，不得过紧或过松。过紧则容易使管口玻璃破裂，通气性能变差，并且操作也不方便，过松则易脱落和招致空气中微生物侵入，引起杂菌污染。
(4)棉塞插入的深度，一般应以保持2.5—3.5cm长为宜，过浅容易脱落，过深又易和培养基接触，也易引起污染杂菌。
(5)对于那些质量较差，灰尘较多、纤维较短的次品棉花，不宜作培养菌种使用。应采用一级或二级没有脱脂的棉花来制作棉塞。
(6)用棉塞塞好后的试管或三角瓶在灭菌的时候，一般多采用干热灭菌法灭菌，即是把已塞好棉塞的试管或三角瓶放入干热灭菌箱内，升温至145—160℃，保持1—2小时，方可达到灭菌的目的。在灭菌的过程中要特别小心，操作人员不能离开岗位，所控制的温度不得高于175℃，超过此温度很容易引起棉塞的燃烧，刚停止加热的干热灭菌箱，不能马上打开箱门，要待温度降至80℃以下时，才可打开箱门，将试管或三角瓶取出，放入专用框内或试管架上，置于清洁、干燥的地方保存备用。 |
