本标准参照采用国际标准ISO 6490/2－1983《动物饲料——钙含量测定——原子吸收分光光度法》。
1 主题内容与适用范围
本标准规定了用原子吸收分光光度法和滴定法测定食物中钙。
本标准适用于各种食物中钙的测定。
第一篇 原子吸收分光光度法
2 原理
样品经湿消化后，导入原子吸收分光光度计中，经火焰原子化后，吸收422.7nm的共振线，其吸收量与含量成正比，与标准系列比较定量。
3 试剂
要求使用去离子水，优级纯试剂。
3.1 盐酸(GB 622)。
3.2 硝酸(GB 626)。
3.3 高氯酸(GB 623)。
3.4 混合酸消化液：硝酸与高氯酸比为4∶1。
3.5 0.5N硝酸溶液：量取45mL硝酸，加去离子水并稀释至1000mL。
3.6 2%氧化镧溶液：称取25g氧化镧(纯度大于99.99%)，加75mL盐酸于1000mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度。
3.7 钙标准溶液：精确称取1.2486g碳酸钙(纯度大于99.99%)，加50mL去离子水，加盐酸溶解，移入1000mL容量瓶中，加2%氧化镧稀释至刻度。贮存于聚乙烯瓶内，4℃保存。此溶液每毫升相当于500μg钙。
3.8 钙标准使用液：钙标准使用液的配制见表1。
表1 钙标准使用液配制
钙标准使用液配制后，贮存于聚乙烯瓶内，4℃保存。
4 仪器与设备
所用玻璃仪器均以硫酸－重铬酸钾洗液浸泡数小时，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗晒干或烘干，方可使用。
4.1 实验室常用设备。
4.2 原子吸收分光光度计。
5 操作步骤
5.1 样品处理
5.1.1 样品制备
微量元素分析的样品制备过程中应特别注意防止各种污染。所用设备如电磨、绞肉机、匀浆器、打碎机等必须是不锈钢制品。所用容器必须使用玻璃或聚乙烯制品，做钙测定的样品不得用石磨研碎。湿样(如蔬菜、水果、鲜鱼、鲜肉等)用水冲洗干净后，要用去离子水充分洗净。干粉类样品(如面粉、奶粉等)取样后立即装容器密封保存，防止空气中的灰尘和水分污染。
5.1.2 样品消化
精确称取均匀样品干样0.5～1.5g(湿样2.0～4.0g，饮料等液体样品5.0～10.0g)于250mL高型烧杯，加混合酸消化液20～30mL，上盖表皿。置于电热板或电沙浴上加热消化。如未消化好而酸液过少时，再补加几毫升混合酸消化液，继续加热消化，直至无色透明为止。加几毫升去离子水，加热以除去多余的硝酸。待烧杯中的液体接近2～3mL时，取下冷却。用去离子水洗并转移于10mL刻度试管中，加去离子水定容至刻度(测钙时用2%氧化镧溶液稀释定容)。
取与消化样品相同量的混合酸消化液，按上述操作做试剂空白试验测定。
5.2 测定
将钙、标准使用液分别配制不同浓度系列的标准稀释液，见表2，测定操作参数见表3。
表2 不同浓度系列标准稀释液的配制方法
表3 测定操作参数
其他实验条件：仪器狭缝、空气及乙快的流量、灯头高度、元素灯电流等均按使用的仪器说明调至最佳状态。
将消化好的样液、试剂空白液和各元素的标准浓度系列分别导入火焰进行测定。
5.3 计算
5.3.1 标准曲线法
以各浓度系列标准溶液与对应的吸光度绘制标准曲线。钙标准曲线如图1所示。它的线性相关系数为0.9996。
测定用样品液及试剂空白液由标准曲线查出浓度值(c及c0，再按式(1)计算。
式中：X——样品中元素的含量，同mg/100g；
c——测定用样品中元素的浓度(由标准曲线查出)，μg/mL；
c0——试剂空白液中元素的浓度(由标准曲线查出)，μg/mL；
V——样品定容体积，mL；
f——稀释倍数；
m——样品质量，g；
5.3.2 回归方程法
由各元素标准稀释液浓度与对应的吸光度计算出回归方程(也可以输入计算器得出回归方程)，计算见式(2)。
c＝ay＋b……………………………………………(2)
式中：c——测定用样品中元素的浓度(可由计算器直接得出，μg/mL)；
a——曲线斜率；
y——元素的吸收度；
b——曲线的截距。
由回归方程或计算器得出测定样液及试剂空白液的浓度后，再由式(3)计算。
式中各字母的含义同曲线法说明。
5.3.3 结果的重复性
同实验室平行测定或连续两次测定结果的重现性钙小于10%。
最低检测限：钙0.1μg。
第二篇 滴定法(EDTA法)
6 原理
钙与氨羧络合剂能定量地形成金属络合物，其稳定性较钙与指示剂所形成的络合物为强。在适当的pH值范围内，以氨羧络合剂EDTA滴定，在达到当量点时，EDTA就自指示剂络合物中夺取钙离子，使溶液呈现游离指示剂的颜色(终点)。根据EDTA络合剂用量，可计算钙的含量。
7 试剂
要求使用去离子水，优级纯试剂。
7.1 1.25mol/L氢氧化钾溶液：精确称取71.13g氢氧化钾，用去离子水稀释至1000mL。
7.2 1%氰化钠溶液：称取1.0g氰化钠，用去离子水稀释至100mL。
7.3 0.05mol/L柠檬酸钠溶液：称取14.7g柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)，用去离子水稀释至1000mL。
7.4 混合酸消化液：硝酸(GB 626)与高氯酸(GB 623)比为4∶1。
7.5 EDTA溶液：精确称取4.50g EDTA(乙二胺四乙酸二钠)，用去离子水稀释至1000mL，贮存于聚乙烯瓶中，4℃保存。使用时稀释10倍即可。
7.6 钙标准溶液：精确称取0.1248g碳酸钙(纯度大于99.99%，105～110℃烘干2h)，加20mL去离子水及3mL 0.5mol/L盐酸溶解，移入500mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，贮存于聚乙烯瓶中，4℃保存。此溶液每毫升相当于100μg钙。
7.7 钙红指示剂：称取0.1g钙红指示剂(C21O7N2SH14)，用去离子水稀释至100mL，溶解后即可使用。贮存干冰箱中可保持一个半月以上。
8 仪器与设备
所有玻璃仪器均以硫酸－重铬酸钾洗液浸泡数小时，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗晒干或烘干，方可使用。
8.1 实验室常用玻璃仪器：高型烧杯(250mL)，微量滴定管(1或2mL)，碱式滴定管(50mL)，刻度吸管(0.5～1mL)，试管等。
8.2 电热板：1000～3000W，消化样品用。
9 样品制备
同第一篇。
10 操作步骤
10.1 样品消化
同第一篇。
10.2 测定
10.2.1 标定EDTA浓度
吸取0.5mL钙标准溶液，以EDTA滴定，标定其EDTA的浓度，根据滴定结果计算出每毫升EDTA相当于钙的毫克数，即滴定度(T)。
10.2.2 样品及空白滴定
吸取0.1～0.5mL(根据钙的含量而定)样品消化液及空白于试管中，加1滴氰化钠溶液和0.1mL柠檬酸钠溶液，用滴定管加1.5mL 1.25mol/L氢氧化钾溶液，加3滴钙红指示剂，立即以稀释10倍EDTA溶液滴定，至指示剂由紫红色变蓝为止。
10.3 计算
样品中该元素的含量按式(4)计算：
式中：X——样品中元素含量，mg/100g；
T——EDTA滴定度，mg/mL；
V——滴定样品时所用EDTA量，mL；
V0——滴定空白时所用EDTA量，mL；
f——样品稀释倍数；
m——样品称重量，g。
11 结果的重复性
同实验室平行测定或连续两次测定结果的重复性小于10%。
本方法的检测范围：5～50μg。
附加说明：
本标准由中华人民共和国卫生部卫生监督司提出，食品卫生标准分委员会审查通过。
本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所起草。
本标准主要起草人周兴汉、王光亚。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。 |
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