生产常用菌种的纯培养,主要是指曲霉菌As3·4309和酵母菌南阳1300、南阳1308、K酵母、2610、川345等菌种的移种、扩大培养。现分别叙述如下:
(一)曲霉菌As3·4309的纯培养
As3·4309菌种的纯培养、斜面试管培养适宜于察氏合成培养基中生长和繁殖。察氏合成培养基的配方是:硝酸钠3g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖20-30g、琼脂(洋菜)15g、蒸馏水1000ml。
首先将保藏移传下来或从外购回的原菌种,从冰箱中取出,放入恒温箱内经过活化处理后,在霉菌接种室内,将原菌种转接入已消毒灭菌、并经室温下7—10天的干燥和作过无菌检查的察氏合成培养基上,大约每支原菌种可以转接入5—7支试管。然后再放入恒温培养箱内,32±0.2℃保温培养5—7天,待孢子成熟后,再转接入制好备用的小米培养基试管中,在32℃的恒温箱内培养6—8天,待咖啡色孢子布满试管后,取出,方可制备孢子悬浮液或者放入冰箱内4℃下保藏备用。
孢子悬浮液的制备:将培养成熟的小米试管中的曲霉菌,在霉菌接种室内,转入已先行灭菌、冷却的盛有无菌水的血清瓶中,无菌水一般为300m1,大约每瓶可转入小米试管2—3支,装好后,用手充分振荡摇匀,就制成了孢子悬浮液,就可接入液曲罐中或放入冰箱中保藏备用。
(二)酵母纯培养
生产常用的酵母菌,一般都是在培养室内进行纯培养,纯培养所用培养基,在斜面试管阶段采用米曲汁或麦芽汁琼脂培养基培养,在进行活化、镜检、扩大培养时则多用米曲汁或麦芽汁液体培养基培养。
其操作方法是将所用酵母原菌种,在酵母按种室内,接入已事先消毒、灭菌,并按要求配制的培养基中,接种后,放入恒温箱内保温28—30℃培养,其固体斜面试管培养72—120小时,液体试管、小三角瓶等培养16—24小时,检查确认培养正常,培养成熟后,方可放入冰箱中保存备用。
(三)米曲汁、麦芽汁固(液)体培养基的制备
固体培养基制备:准确量取米曲汁或麦芽汁若干毫升,按体积的1.8(冬)—2.0(夏)%加琼酯作为凝固剂,在加入琼脂前,将米曲汁或麦芽汁糖度调整在12—14Bx之间,调好后,加热使琼酯充分溶解,待全溶后,分别装入巳干热灭菌、冷却的带棉塞的试管中,约每支φ1.5—φ1.8cm试管可装入6—10ml(装到试管长的1/3容量),装好后放入灭菌器中灭菌,灭菌后,取出趁热放成斜面,试管冷后,既制成斜面试管培养基。
液体培养基的制备:将米曲汁或麦芽汁按一定的数量装入试管或小三角瓶中,装入前可在米曲汁或麦芽汁中加入适当的磷酸或无机盐类少量,pH值可在4.5—5.0之间。然后放入灭菌器中灭菌,灭菌温度最好不超过120℃,时间不超过45分钟,以减少营养成分的损失,灭菌后,就是所要制备的液体培养基。
另外,需要说明的是2610酵母菌,因为它是以甘蔗糖蜜为培养基,采用台湾396酵母经驯养而获得的酵母茵。所以,建议培养2610酵母时,采用糖蜜液体培养基。
糖蜜液体培养基配方:将好的糖蜜(也可采用乙糕)用水稀释成16—20Bx,入0.06%的硫酸铵,用硫酸和磷酸调pH值至4.5左右,还可加入适当的蛋白胨作为补充氮源。然后装入试管或三角瓶中灭菌后备用。g